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为保证实验的准确性和安全性必须做质控菌种管理规定
点击次数:74 发布时间:2018-12-25
  为保证实验的准确性和安全性必须做质控菌种管理规定
  微生物实验用菌种是进行新产品研发和生产质量控制的标准物质。为了保证微生物实验的准确灵敏和人员及环境的卫生安全,特制定以下规定:
  1. 菌种采集。实验室用菌种一是到国家法定机构采购,二是购买ATCC菌种,三是科研中菌种交流。不管是哪种来源,均由公司统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。
  2.菌种的活化:购买的标准菌种必须要求是冻干粉,科研中菌种交流可以为斜面或液体。
  菌种的首次活化最好是在非选择性琼脂培养基上,除非特殊情况或特别推荐,一般不用液体培养基。具体使用培养基的情况如下表,详细菌种使用方法见附表:
  方法培养基
  方法1 胰蛋白胨大豆琼脂(TSA),非选择性羊血琼脂,PCA或营养琼脂,35℃正常环境培养24-48小时。
  方法2 非选择性羊血琼脂,35℃正常环境培养24-48小时。
  方法3 巧克力琼脂平板,35℃5-10%CO2环境培养24-48小时。
  方法4 CDC厌氧血琼脂35℃厌氧培养48-72小时;部分专性厌氧菌能需要5-7天,才能充分生长;对于梭菌,以下新鲜培养基也可选用:营养琼脂,TSA琼脂,PCA琼脂,需培养48-96小时。
  方法5 沙堡氏葡萄糖Emmons琼脂25-28℃培养3-7天;也可用PDA琼脂。
  方法6 巧克力琼脂平板,35℃微需氧环境培养48-72小时。
  方法7 改良罗氏琼脂或Middlebrook琼脂,35℃5-10%CO2或正常环境培养7天。
  方法8 缓冲活性碳酵母提取物琼脂,35℃正常环境培养3-5天。
  方法9 巧克力琼脂平板,35℃5-10%CO2环境培养48小时。
  方法10 先用脑心浸出液肉汤或TSB培养基35℃增菌培养18-24小时,再划线至TS A琼脂35℃正常环境培养24-48小时。
  方法11 先接种于MRS肉汤35℃增菌培养24-48小时,再划线接种至含羊血的哥伦比亚CNA培养基35℃5%CO2环境培养24-48小时。
  方法12 PDA琼脂45℃正常环境培养48-72小时。
  方法13 先接种于10B精氨酸肉汤,作系列梯度稀释35℃正常培养至培养基变成粉红色,接入A-8琼脂。3.菌种保存。所有菌种均由实验室专人(双人双锁)保存于专用冰箱或其它保存方式。要建立菌种登记台帐,详细记录菌种采集、保管、制备、使用、处置情况;每一种菌种一定要有本公司的检测鉴定报告(具体的的鉴定方法见ATCC提供的菌种证书方法);具体菌种保存方法如下:
  3.1 干粉菌种:购买的干粉菌种保存于2-8℃冰箱中,可保存3-5年。
  3.2 斜面菌种或液体菌种:
  3.2.1 液氮罐保存方法:用于第一代菌种的长期保存,每种菌种保存5管。
  (1)准备用于液氮保藏的安瓿管或菌种保存管(塑料),要求能耐受温度突然变化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管,安瓿管的大小通常使用75×10mm的,或能容1.2mm液体的。
  (2)加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时,则将空安瓿管塞上棉塞,121℃灭菌15分钟:若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液,加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限,而后再用121℃灭菌15分钟。
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