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ATCC细胞株稳定整合试验中的几个关键因素
点击次数:448 发布时间:2016-08-09
     ATCC细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line), 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。    计稳定株构建实验需要考虑的因素有哪些
    ATCC细胞株稳定整合试验中的几个关键因素:
    1),外源插入片段的拷贝数。多数情况下,低拷贝甚至是单拷贝可以减少
    人为实验因素的干扰。
    2),整合的几率,这不仅决定了稳定株筛选的难易程度,而且还可以帮助
    人们更容易得到混合稳定株。
    3),整合位点的转录活跃度,决定了稳定株中外源片段的表达质量。zui理
    想的状况是单拷贝,但转录活性比较高。
    4),整合后的稳定性。不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定 性,有些区域易发生重组或者丢失,从而导致稳定株再次丢失的情况。
    5),zui好使用混合稳定株或者获得多个不同单克隆稳定株。因为稳定整合往往伴随这插入失活宿主内源基因,所以实验时通过使用混合稳定株,或者对多个单克隆稳定株进行比较,可以帮助研究人员获得更精确的实验数据。
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